荧光分光光度计维生素C含量测定上的应用

依据国家标准GB 5413.18-2010《食品安全国家标准 婴幼儿食品和乳品中维生素C的测定》，应用天津博精CMF-300型荧光分光光度计对婴幼儿乳品中维生素C的含量进行测定。结果证明此方法操作简便，线性良好是测定食品中维生素C含量的理想方法。 

关键词：  荧光分光光度法  维生素C  抗坏血酸  食品  婴幼儿乳品

· 原理

维生素C（抗坏血酸）在活性炭存在下氧化成脱氢抗坏血酸，它与邻苯二胺（OPDA）反应生成荧光物质（喹唔啉），用荧光分光光度计测定其荧光强度，其荧光强度与维生素C的浓度成正比。

脱氢抗坏血酸与硼酸可形成复合物不与邻苯二胺反应，以此排除试样中荧光杂质产生的干扰。

· 实验条件

仪器及附件：

CMF-300型荧光分光光度计

荧光石英比色皿

分析条件：

激发波长：350nm

发射波长：430nm

药品：

淀粉酶、偏磷酸、乙酸、活性炭、盐酸、亚铁氰化钾、结晶乙酸钠、硼酸、邻苯二胺、维生素C标准品。

其它：

分析天平（0.0001g）、烤箱、水浴锅、80～200目筛子、研钵、抽滤装置、称量纸、药勺、量筒、容量瓶、具塞三角瓶、漏斗、滤纸、移液管、具塞比色管、烧杯、擦镜

纸、玻璃棒、胶头滴管等。

· 实验流程

样品前处理：

样品前处理步骤如下图所示：

图1  样品前处理流程图

备注：样品称样量依据其本身维生素C含量（约2mg）而定。淀粉酶活力为1.5U/mg，根据活力单位大小调节用量。

样品待测液制备：

样品经前处理后还需进行进一步的处理才可以上机进行检测。

样品待测液制备步骤如下图所示：

图2  样品空白溶液待测液和样品溶液待测液配制流程图

备注：样品称样量依据其本身维生素C含量（约2mg）而定。淀粉酶活力为1.5U/mg，根据活力单位大小调节用量。

标准样品待测液制备:

精密称取0.050g维生素C标准品，用偏磷酸-乙酸溶液A溶解并定容至50mL，再准确吸取10.0mL该溶液用偏磷酸-乙酸溶液A稀释并定容至100mL，配制成100μg/mL的标准溶液。

准确吸取经过处理的VC标准溶液（10μg/mL）0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL分别置于10mL试管中，补水至2.0mL，配制成VC标准样品工作液。再分别加入5mL邻苯二胺（OPDA）溶液，摇匀避光静置60min，即配制成VC标准样品待测液。

标准样品待测液制备步骤如下图所示：

图3  VC标准空白溶液待测液和VC标准系列溶液待测液配制流程图

· 测定结果

式中：

X——试样中维生素C的含量，单位为毫克每百克（mg/100g）；

V——试样的定容体积，单位为毫升（mL）；

c——由标准曲线查得的试样测定液中维生素C的质量浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）；

m——试样的质量，单位为克（g）；

f——试样稀释倍数。

· 结论

采用荧光分光光度法测定食品中维生素C含量，操作简单，方法准确，是一种理想的方法。

由于维生素C本身易光解而且在测定过程中需要对每一种样品进行样品的背景扣除，因此，此实验对仪器的功能要求更高。CMF-300型荧光分光光度计在硬件上采用了激发侧挡光快门的设置，从而避免了样品被强光的直接照射；软件上采用了的双背景扣除功能，自动计算维生素C浓度，使整个实验操作简便，结果重现性良好。